Mums apkārt ir daudz neapdziedātu varoņu, kuri it kā ir parasti, bet patiesībā viņi klusībā mums dod lielu ieguldījumu.Proteināze K ir "neapdziedāts varonis" molekulārās diagnostikas nozarē, lai gan salīdzinājumā ar "lielo un jaudīgo" šajā nozarē proteināze K ir tik vāja, ka mēs jau sen esam ignorējuši tās nozīmi.Līdz ar jaunās kroņa epidēmijas uzliesmojumu ir pieaudzis pieprasījums pēc proteināzes K, un piedāvājums gan mājās, gan ārvalstīs ievērojami atpaliek no patēriņa, un visi pēkšņi saprata, ka proteināze K ir tik svarīga.
Kāda ir proteināzes K izmantošana?
Proteināze K ir serīna proteāze ar proteolītisku enzīmu aktivitāti un var uzturēt aktivitāti plašā vidē (pH (4-12,5), augsts sāls buferšķīdums, augsta temperatūra 70°C utt.).Turklāt proteināzes K aktivitāti neinhibē SDS, urīnviela, EDTA, guanidīna hidrohlorīds, guanidīna izotiocianāts u.c., un noteikts mazgāšanas līdzekļa daudzums var arī pastiprināt proteināzes K aktivitāti. Medicīniskā ārstēšanā (vīrusu un mikrobu dezinfekcija ), pārtika (gaļas mīkstināšana), āda (matu mīkstināšana), vīna darīšana (spirta dzidrināšana), aminoskābju sagatavošana (degradētas spalvas), nukleīnskābju ekstrakcija, in situ hibridizācija u.c., proteināze K Ir pielietojumi.Visbiežāk izmantotais pielietojums ir nukleīnskābju ekstrakcija.
Proteināze K var fermentēt visu veidu proteīnus paraugā, tostarp tos histonus, kas ir cieši saistīti ar nukleīnskābēm, lai nukleīnskābes varētu atbrīvot no parauga un izdalīties ekstraktā, atvieglojot nākamo ekstrakcijas un attīrīšanas posmu.Vīrusu nukleīnskābes noteikšanā proteināze K ir viena no svarīgajām vīrusa paraugu ņemšanas šķīduma sastāvdaļām.Proteināze K var saplaisāt un inaktivēt vīrusa apvalka proteīnu, kas ir drošāks transportēšanas un noteikšanas stadijā;turklāt proteināze K var arī noārdīt RNāzi, kas novērš vīrusa RNS noārdīšanos un atvieglo nukleīnskābju noteikšanu.
Proteināzes K slava vienas nakts laikā
Zinātniskās pētniecības vai IVD jomā nukleīnskābju ekstrakcija ir visvienkāršākais eksperiments, tāpēc proteināze K vienmēr ir bijusi ļoti svarīga eksistence.Tomēr agrāk proteināze K bija daudz mazāk pazīstama nekā tās loma.Liela daļa no tā bija tāpēc, ka proteināzes K piedāvājuma un pieprasījuma attiecības bija ļoti stabilas.Tikai daži cilvēki domā, ka proteāzes K piegāde būtu problēma.
Līdz ar jaunās kroņa epidēmijas uzliesmojumu ir palielinājies pieprasījums pēc nukleīnskābju testēšanas.2020. gada jūnija beigās Ķīna ir pabeigusi gandrīz 90 miljonus jaunu kronu testu, un šis skaitlis ir vēl satraucošāks pasaules mērogā.Nukleīnskābju ekstrakcijas eksperimentos proteināzes K darba koncentrācija ir aptuveni 50-200 μg/mL.Parasti, lai iegūtu nukleīnskābes paraugu, ir nepieciešami aptuveni 100 μg proteināzes K.Faktiskā lietošanā, lai palielinātu nukleīnskābju ekstrakcijas efektivitāti, proteināze K bieži tiks izmantota palielinātā daudzumā.Jaunā koronavīrusa nukleīnskābju noteikšana ir radījusi lielu pieprasījumu pēc proteināzes K.Sākotnējais proteināzes K piedāvājuma un pieprasījuma līdzsvars tika ātri izjaukts, un proteināze K vienā naktī kļuva par svarīgu epidēmijas profilakses materiālu.
Grūtības proteāzes K ražošanā
Lai gan līdz ar epidēmijas attīstību cilvēki ir novērtējuši proteināzes K svarīgo vērtību, ir apkaunojoši, ka proteināzes K pārlieku zemā līmeņa dēļ tikai daži vietējie uzņēmumi ir iesaistījušies proteināzes K ražošanā. Kad cilvēki vēlas izveidot proteināzes K ražošanu Ražošanas procesā tika atklāts, ka proteināze K ir ārkārtīgi īpašs proteīns.Ir ārkārtīgi grūti īsā laika periodā paplašināt proteināzes K ražošanas jaudu.
Proteīna K liela mēroga ražošana saskaras ar šādām grūtībām
1. Zema izteiksme
Proteināze K var nespecifiski noārdīt lielāko daļu olbaltumvielu un izraisīt nopietnu toksicitāti ekspresijas saimniekšūnai.Tāpēc proteināzes K ekspresijas līmenis parasti ir ļoti zems.Ekspresijas sistēmu un celmu skrīningam, kas ļoti ekspresē proteināzi K, parasti ir nepieciešams ilgāks cikls.
2. Pigmentu un nukleīnskābju atliekas
Liela mēroga fermentācija ievada lielu daudzumu pigmenta un saimnieka nukleīnskābju atlikumu.Šos piemaisījumus ir grūti noņemt ar vienkāršu attīrīšanas procesu, un sarežģīta attīrīšana palielina izmaksas un samazina atgūšanas ātrumu.
3. Nestabilitāte
Proteināze K nav pietiekami stabila, tā var sevi enzimizēt, un ir grūti to ilgstoši stabili uzglabāt 37°C bez aizsarglīdzekļa.
4. Viegli nogulsnējas
Sagatavojot liofilizēto proteināzes K pulveri, lai nodrošinātu, ka proteināzes K cietvielu saturs liofilizētajā pulverī ir liels, nepieciešams pievienot liofilizētu aizsarglīdzekli augstā koncentrācijā, bet, kad proteināzes K koncentrācija sasniedz 20mg/mL un vairāk, tas ir viegli Agregācija veido nogulsnes, kas rada lielas grūtības proteināzes K ar augstu cietvielu saturu liofilizācijā.
5. Lielas investīcijas
Proteināzei K ir spēcīga proteāzes aktivitāte, un tā laboratorijā var hidrolizēt citas proteāzes.Tāpēc proteināzei K ir nepieciešamas specializētas ražošanas zonas, aprīkojums un personāls pētniecībai, attīstībai un ražošanai.
XD BIOCHEM proteināzes K šķīdums
XD BIOCHEM ir nobriedusi proteīnu ekspresijas un attīrīšanas platforma, un tai ir bagāta pieredze rekombinanto proteīnu ekspresijā un attīrīšanā un ražošanas procesu optimizācijā.Strauji izveidojot pētniecības un attīstības komandu, ir pārvarēts liela mēroga proteināzes K ražošanas process.Mēneša liofilizētā pulvera produkcija ir vairāk nekā 30 kg.Produktam ir stabila veiktspēja, augsta fermentu specifiskā aktivitāte, un tas nesatur saimnieka citohroma un nukleīnskābju atlikumus.Laipni lūdzam sazināties ar XD BIOCHEM. Iegūstiet izmēģinājuma paketi (e-pasts:sales@xdbiochem.comTālr.: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM tehniskie risinājumi ietver
Izmantojot vairāku kopiju plazmīdu integrāciju, tiek atlasīti augstas ekspresijas celmi ar ekspresijas līmeni 8g/L, kas pārvar proteāzes K zemā ekspresijas līmeņa problēmu.
Izveidojot daudzpakāpju attīrīšanas procesu, proteāzes K saimnieka citohroma un nukleīnskābju atlikumi tika veiksmīgi noņemti zem standarta vērtības.
Izmantojot augstas caurlaidības aizsargbufera preparātu skrīningu, tika izvēlēts buferšķīdums, kas var stabili uzglabāt proteināzi K 37 °C temperatūrā.
Skrīninga buferi novērš problēmu, ka proteināze K ir viegli agregējama un nogulsnējama augstās koncentrācijās, un tas ir pamats proteināzes K augsta cieto vielu satura žāvēšanai ar liofilizāciju.
XD BIOCHEM proteināzes K paraugs
XD BIOCHEM proteināzes K stabilitātes tests: pēc 80 dienām istabas temperatūrā aktivitātē nebūs būtisku izmaiņu
XD BIOCHEM proteināzes K stabilitātes tests: pēc 80 dienām istabas temperatūrā aktivitātē nebūs būtisku izmaiņu.
XD BIOCHEM proteināzes K un konkurējošu produktu nukleīnskābju ekstrakcijas efekta salīdzinājums.Nukleīnskābju ekstrakcijas procesā tiek izmantota attiecīgi XD BIOCHEM un konkurētspējīga proteināze K.XD BIOCHEM proteināzes K ekstrakcijas efektivitāte ir augstāka un mērķa gēna Ct vērtība ir zemāka.
Izlikšanas laiks: 31. decembris 2021