4-nitrofenilbeta-D-galaktopiranozīds CAS: 200422-18-0

Iedarbība: ONPG ir substrāts, ko īpaši izmanto, lai noteiktu enzīma β-galaktozidāzes klātbūtni un aktivitāti. Kad β-galaktozidāzes enzīms ir klāt un ir aktīvs, tas sašķeļ ONPG divos produktos: o-nitrofenolā un galaktozes atvasinājumā. O-nitrofenola atbrīvošanās izraisa dzeltenas krāsas maiņu, ko var izmērīt, izmantojot spektrofotometru.

Pielietojums: ONPG ir vairāki pielietojumi molekulārās bioloģijas un bioķīmijas pētījumos:

β-galaktozidāzes aktivitātes noteikšana: ONPG parasti tiek izmantots, lai mērītu un kvantitatīvi noteiktu β-galaktozidāzes enzīma aktivitāti. O-nitrofenola veidošanās ātrumu, kas ir tieši proporcionāls enzīma aktivitātei, var izmērīt spektrofotometriski.

Gēnu ekspresija un regulācija: ONPG bieži tiek izmantots eksperimentos, kas saistīti ar gēnu ekspresijas un regulācijas pētījumiem. To bieži izmanto saplūšanas proteīnu testos, piemēram, plaši izmantotajā lacZ saplūšanas sistēmā, lai pētītu gēnu ekspresiju specifisku promotoru kontrolē. Beta-galaktozidāzes aktivitāte, kas mērīta, izmantojot ONPG, sniedz ieskatu gēnu ekspresijas līmenī.

β-galaktozidāzes aktivitātes skrīnings: ONPG var izmantot kā kolorimetrisku skrīninga metodi rekombinantās DNS tehnoloģijā, lai identificētu LacZ gēna, kas kodē β-galaktozidāzi, klātbūtni un funkcionalitāti. Šī skrīninga metode palīdz identificēt klonus, kas satur interesējošo gēnu.

Enzīmu kinētikas pētījumi: ONPG ir noderīgs arī β-galaktozidāzes enzīma kinētikas pētīšanā. Mērot enzīma-substrāta reakcijas ātrumu dažādās substrāta koncentrācijās, ir iespējams noteikt kinētiskos parametrus, piemēram, Mihaelisa-Mentena konstantes (Km) un maksimālos reakcijas ātrumus (Vmax).