4-nitrofenilbeta-D-galaktopiranozīds CAS:200422-18-0

Ietekme: ONPG ir substrāts, ko īpaši izmanto, lai noteiktu enzīma β-galaktozidāzes klātbūtni un aktivitāti.Kad β-galaktozidāzes enzīms ir klāt un aktīvs, tas sadala ONPG divos produktos: o-nitrofenolā un galaktozes atvasinājumā.O-nitrofenola izdalīšanās rezultātā mainās dzeltena krāsa, ko var izmērīt, izmantojot spektrofotometru.

Pielietojums: ONPG ir vairāki pielietojumi molekulārās bioloģijas un bioķīmijas pētījumos:

β-galaktozidāzes aktivitātes noteikšana: ONPG parasti izmanto, lai mērītu un kvantitatīvi noteiktu β-galaktozidāzes enzīma aktivitāti.O-nitrofenola veidošanās ātrumu, kas ir tieši proporcionāls enzīma aktivitātei, var izmērīt spektrofotometriski.

Gēnu ekspresija un regulēšana: ONPG bieži izmanto eksperimentos, kas saistīti ar gēnu ekspresijas un regulēšanas pētījumiem.To bieži izmanto saplūšanas proteīnu testos, piemēram, parasti izmantotajā lacZ saplūšanas sistēmā, lai pētītu gēnu ekspresiju specifisku promotoru kontrolē.Beta-galaktozidāzes aktivitāte, ko mēra, izmantojot ONPG, sniedz ieskatu gēnu ekspresijas līmenī.

β-galaktozidāzes aktivitātes skrīnings: ONPG var izmantot kā kolorimetrisko skrīninga metodi rekombinantās DNS tehnoloģijā, lai noteiktu LacZ gēna klātbūtni un funkcionalitāti, kas kodē β-galaktozidāzi.Šī skrīninga metode palīdz identificēt klonus, kas satur interesējošo gēnu.

Fermentu kinētikas pētījumi: ONPG ir noderīgs arī β-galaktozidāzes enzīma kinētikas pētījumos.Mērot fermentu-substrāta reakcijas ātrumu pie dažādām substrāta koncentrācijām, ir iespējams noteikt tādus kinētiskos parametrus kā Mihaelisa-Mentena konstantes (Km) un maksimālos reakcijas ātrumus (Vmax).