Kā noteikt optimālo koncentrāciju?
Induktors IPTG (izopropil-beta-d-tiogalaktozīds), jo augstāka ir koncentrācija, jo labāk.Optimālā koncentrācija ir atkarīga no konkrētajiem eksperimenta apstākļiem un vēlamā indukcijas efekta.
Parasti IPTG koncentrācija tiek izmantota diapazonā no 0,1 līdz 1 mM.Zemākas koncentrācijas var samazināt nelabvēlīgo ietekmi uz šūnu augšanu un var samazināt citotoksicitāti mērķa proteīnu pārmērīgas ekspresijas dēļ.Augstākas koncentrācijas var izraisīt pārmērīgu šūnu vielmaiņas slogu, ietekmējot šūnu augšanu un ekspresijas efektivitāti.
Optimālās koncentrācijas noteikšanas veids var būt mērķa proteīna ekspresijas līmeņa novērtēšana, veicot IPTG indukcijas testus dažādās koncentrācijās.Maza mēroga kultūras testus var veikt, izmantojot dažādas IPTG koncentrācijas (piemēram, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM utt.), un ekspresijas efektu dažādās koncentrācijās var novērtēt, nosakot mērķa proteīna ekspresijas līmeni (piemēram, Western blot vai fluorescences noteikšana).Saskaņā ar eksperimentālajiem rezultātiem par optimālo koncentrāciju tika izvēlēta koncentrācija ar vislabāko ekspresijas efektu.
Turklāt varat arī atsaukties uz attiecīgo literatūru vai citu laboratoriju pieredzi, lai izprastu bieži izmantoto IPTG koncentrācijas diapazonu līdzīgos eksperimenta apstākļos, un pēc tam optimizēt un pielāgot atbilstoši eksperimentālajām vajadzībām.
Ir svarīgi atzīmēt, ka optimālā koncentrācija var atšķirties atkarībā no dažādām ekspresijas sistēmām, mērķa proteīniem un eksperimentālajiem apstākļiem, tāpēc vislabāk ir optimizēt katrā gadījumā atsevišķi.
Izlikšanas laiks: 28. septembris 2023